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大腸桿菌菌株的分型及區(qū)別簡介
點(diǎn)擊次數(shù):881 更新時(shí)間:2023-06-06

  1:DH5a菌株

  DH5a是一種常用于質(zhì)??寺〉木?。E.coliDH5a在使用pUC系列質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化時(shí),可與載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α-互補(bǔ)??捎糜谒{(lán)白斑篩選鑒別重組菌株。

  基因型:F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA1

  2:BL21(DE3)菌株

  該菌株用于高效表達(dá)克隆于含有噬菌體T7啟動子的表達(dá)載體(如pET系列)的基因。T7噬菌體RNA聚合酶位于λ噬菌體DE3區(qū),該區(qū)整合于BL21的染色體上。該菌適合表達(dá)非毒性蛋白。

  基因型:F-,ompT,hsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3)

  3:BL21(DE3)pLysS菌株

  該菌株含有質(zhì)粒pLysS,因此具有氯霉su抗性。PLysS含有表達(dá)T7溶jun酶的基因,能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平,但不干擾目的蛋白的表達(dá)。該菌適合表達(dá)毒性蛋白和非毒性蛋白。

  基因型:F-,ompThsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3,pLysS,Camr

  4:JM109菌株

  該菌株在使用pUC系列質(zhì)粒載體進(jìn)行DNA轉(zhuǎn)化或用M13phage載體進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí),由于載體DNA產(chǎn)生的LacZa多肽和JM09編碼的LacZΔM15進(jìn)行α-互補(bǔ),從而顯示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鑒別重組體菌株

  基因型:recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,Δ(lac-proAB)/F’

  5:TOP-/10菌株

  該菌株適用于高效的DNA克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增,能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定遺傳。

  基因型:F-,mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC),φ80,lacZΔM15,△lacⅩ74,recA1,araΔ139Δ(ara-leu)7697,galU,galK,rps,(Strr)endA1,nupG

  6:HB101菌株

  該菌株遺傳性能穩(wěn)定,使用方便,適用于各種基因重組實(shí)驗(yàn)

  基因型:supE44,hsdS20(rB-mB-),recA13,ara-14,proA2,lacY1,galK2,rpsL20,xyl-5,mtl-1,leuB6,thi-1M110或SCS110

  大多數(shù)大腸桿菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶,前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基,后者在CCA/TGC序列的第一個(gè)胞嘧啶C-5位置上引入甲基。常用的菌株都會產(chǎn)生dam,dcm,從而受到甲基化的影響.部分限制性內(nèi)切酶對甲基化的DNA不能切割,如FbaI和MboI等,一般生物公司提供的內(nèi)切酶說明中均有說明。大多數(shù)酶切位點(diǎn)的甲基化不影響切割,而有些會影響,如XbaI,BclI等。而且甲基化只發(fā)生在特定序列,以XbaI為例,只有在位點(diǎn)序列旁出現(xiàn)GA或TC,該XbaI位才會被甲基化。而要解除這種限制修飾作用通常有兩種方法:

 ?。?)選用上述酶的同功酶,如Sau3AI,DNA識別切割位點(diǎn)與MboI相同;但不受甲基化影響;

 ?。?)利用甲基化酶缺失的受體細(xì)胞進(jìn)行DNA的制備,如E.coliJM110和鏈霉菌等,前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出,而后者細(xì)胞內(nèi)本就沒有甲基化酶,從這些細(xì)胞中抽提的DNA就能被上述酶切割。


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